وائرس نيوڪليڪ ايسڊ جي چڪاس

سڀ کان وڌيڪ وائرس جي جينوميڪ ترتيبن کي معلوم ڪيو ويو آهي.نيوڪلڪ ايسڊ پروبس جيڪي ڊي اين اي جا ننڍا حصا آهن جيڪي مڪمل طور تي وائرل ڊي اين اي يا آر اين اي حصن سان هائبرڊائيز ڪرڻ لاءِ ٺهيل آهن.پوليميرس زنجير ردعمل (PCR) وائرل ڳولڻ لاء هڪ وڌيڪ موثر ٽيڪنڪ آهي.هاء throughput تشخيصي طريقا تازو ترقي ڪئي وئي آهي.

A. نيوڪليڪ ايسڊ هائبرڊائيزيشن ٽيڪنڪ

نيوڪليڪ ايسڊ هائبرڊائيزيشن، خاص طور تي ڏاکڻي بلوٽنگ (ڏکڻ) ۽ اترين بلٽنگ (اتر) سميت، وائرس جي تشخيصي ميدان ۾ هڪ تيز ترقي ڪندڙ نئين ٽيڪنڪ آهي.هائيبرڊائيزيشن جي جائزي جو مقصد ڊي اين اي جي مختصر حصن کي استعمال ڪرڻ آهي (جنهن کي "پروب" سڏيو ويندو آهي) مڪمل طور تي وائرل ڊي اين اي يا آر اين اي حصن سان هائبرڊائيز ڪرڻ لاء ٺهيل آهي.گرم ڪرڻ يا الڪائن جي علاج سان، ڊبل اسٽرينڊ ٽارگيٽ ڊي اين اي يا آر اين اي کي الڳ الڳ ڪنارن ۾ ورهايو ويندو آهي ۽ پوءِ هڪ مضبوط سپورٽ تي متحرڪ ڪيو ويندو آهي.ان کان پوء، تحقيق شامل ڪئي وئي آهي ۽ ٽارگيٽ ڊي اين اي يا آر اين اي سان هائبرڊائز ڪيو ويو آهي.جيئن ته جاچ کي آئسوٽوپ يا غير ريڊيويڪل نيوڪلائيڊ سان ليبل ڪيو ويو آهي، ٽارگيٽ ڊي اين اي يا آر اين اي آٽو ريڊيوگرافي ذريعي يا بايوٽين-ايوڊين سسٽم ذريعي ڳولي سگهجي ٿو.جيئن ته اڪثر وائرل جينوم کي ڪلون ۽ ترتيب سان ترتيب ڏنو ويو آهي، انهن کي وائرس جي مخصوص ترتيبن کي استعمال ڪندي ڳولي سگهجي ٿو جيئن نموني ۾ تحقيق.في الحال، هائبرڊائيزيشن جي طريقن ۾ شامل آهن: ڊٽ بلاڪ، سيلز ۾ سيٽو هائبرڊائيزيشن، ڊي اين اي بلٽنگ (ڊي اين اي) (سدرن بلٽ) ۽ آر اين اي بلٽنگ (آر اين اي) (اتر داغ).

B.PCR ٽيڪنالاجي

تازن سالن ۾، پي سي آر جي بنياد تي ويٽرو نيوڪلڪ ايسڊ امپليفڪيشن ٽيڪنالاجي جو هڪ سلسلو تيار ڪيو ويو آهي، غير حساس يا غير پوکيل وائرس کي جانچڻ لاءِ.پي سي آر هڪ طريقو آهي جيڪو ويٽرو پوليمريز ردعمل ذريعي مخصوص ڊي اين اي ترتيب کي ترتيب ڏئي سگهي ٿو.پي سي آر جي عمل ۾ ٽن مرحلن جو حرارتي چڪر شامل آهي: ڊينيچريشن، اينيلنگ، ۽ ايڪسٽينشن تيز گرمي پد (93℃~95℃) تي، ڊبل اسٽرينڊ ڊي اين اي کي ٻن واحد ڊي اين اي اسٽرينڊز ۾ ورهايو ويندو آهي.پوءِ گھٽ درجه حرارت تي (37 ℃ ~ 60 ℃)، ٻه ٺھيل نيوڪليوٽائڊ پرائمر مڪمل ڪندڙ ڊي اين اي سيگمينٽس کي ڳنڍيندا آھن؛جڏهن ته Taq enzyme (72 ℃) لاءِ مناسب گرمي پد تي، نئين ڊي اين اي زنجيرن جي ٺهڻ شروع ٿئي ٿي پرائمر 3 جي آخر ۾ مڪمل ڊي اين اي کي ٽيمپليٽس طور استعمال ڪندي ۽ سنگل نيوڪليوٽائڊس کي مواد طور.تنهن ڪري هر چڪر کان پوء، هڪ DNA زنجير ٻن زنجيرن ۾ وڌائي سگهجي ٿو.هن عمل کي ورجائڻ سان، هڪ چڪر ۾ ٺهيل هر ڊي اين اي زنجير کي ايندڙ چڪر ۾ ٽيمپليٽ طور استعمال ڪري سگهجي ٿو، ۽ هر چڪر ۾ ڊي اين اي زنجيرن جو تعداد ٻيڻو ڪيو وڃي ٿو، جنهن جو مطلب آهي ته پي سي آر جي پيداوار 2n لاگ اسپيڊ ۾ وڌي وئي آهي.25 کان 30 چڪر کان پوء، پي سي آر جي پيداوار جي سڃاڻپ اليڪٽرروفورسس ذريعي ڪئي وئي آهي، ۽ مخصوص ڊي اين اي پروڊڪٽس UV روشني (254nm) هيٺ ڏسي سگهجي ٿو.ان جي خاصيت، حساسيت، ۽ سهولت جي فائدي لاء، پي سي آر کي ڪيترن ئي وائرل انفڪشن جهڙوڪ HCV، HIV، CMV، ۽ HPV جي ڪلينڪ تشخيص ۾ اختيار ڪيو ويو آهي.جيئن ته پي سي آر تمام حساس آهي، اهو ايف جي سطح تي وائرس ڊي اين اي کي ڳولي سگهي ٿو، آپريشن کي تمام احتياط سان ڪيو وڃي ته غلط مثبت کان بچڻ لاء.ان کان علاوه، نيوڪليڪ ايسڊ ٽيسٽ ۾ مثبت نتيجو اهو ناهي ته نموني ۾ زنده متاثر ٿيندڙ وائرس موجود آهي.

پي سي آر ٽيڪنڪ جي وسيع استعمال سان، مختلف ٽيسٽ مقصد لاءِ پي سي آر ٽيڪنڪ جي بنياد تي نيون ٽيڪنڪ ۽ طريقا ٺاهيا ويا آهن.مثال طور، حقيقي وقت مقداري پي سي آر وائرل لوڊ کي ڳولي سگھي ٿو.حالت ۾ پي سي آر استعمال ڪيو ويندو آهي ٽشو يا سيلز ۾ وائرس جي انفيڪشن کي سڃاڻڻ لاءِ؛nested PCR PCR جي specificity وڌائي سگهي ٿو.انهن مان، حقيقي وقت مقداري پي سي آر وڌيڪ تيزيء سان ترقي ڪئي وئي آهي.ڪيتريون ئي نيون ٽيڪنالاجيون، جهڙوڪ TaqMan هائيڊولائيزيشن پروب، هائبرڊائيزيشن پروب، ۽ ماليڪيولر بيڪن پروب، کي حقيقي وقت جي مقداري پي سي آر ٽيڪنڪ ۾ شامل ڪيو ويو آهي، جنهن کي ڪلينڪل ريسرچ ۾ وڏي پيماني تي استعمال ڪيو ويندو آهي.مريضن جي جسم جي رطوبت ۾ وائرل لوڊ کي صحيح طور تي سڃاڻڻ کان علاوه، اهو طريقو پڻ استعمال ڪري سگهجي ٿو دوا جي برداشت ڪندڙ ميوٽنٽ کي ڳولڻ لاء.تنهن ڪري، حقيقي وقت مقداري پي سي آر بنيادي طور تي علاج واري اثر جي تشخيص ۽ دوا جي رواداري نگراني ۾ لاڳو ڪيو ويندو آهي.

C. وائرل نيوڪليڪ ايسڊز جي اعليٰ ذريعي چڪاس

نئين ابتڙ متاثر ٿيندڙ بيمارين جي تيز تشخيص جي ضرورتن کي پورو ڪرڻ لاءِ، ڊي اين اي چپس (ڊي اين اي) جھڙوڪ مختلف اعليٰ درجي جي چڪاس جا طريقا قائم ڪيا ويا آھن.ڊي اين اي چپس لاءِ، مخصوص پروبس ٺهيل آهن ۽ ننڍي سلکان چپس سان تمام گهڻي کثافت ۾ جڙيل آهن ته جيئن ڊي اين اي پروب مائڪرو اري (DNA) ٺاهيو وڃي جنهن کي نموني سان هائبرڊائيز ڪري سگهجي ٿو.هائبرڊائيزيشن جي سگنل کي ڪنفوڪل مائڪرو اسڪينر يا ليزر اسڪينر ذريعي تصويري ڪري سگهجي ٿو ۽ ڪمپيوٽر ذريعي ان تي عمل ڪري سگهجي ٿو ۽ مختلف جينز بابت وڏي ڊيٽا سيٽ حاصل ڪري سگهجي ٿي.ڊي اين اي چپ جا ٻه قسم آهن."سنٿيسس چپ" ھيٺ ڏنل آھي: مخصوص oligonucleotides سڌو سنئون چپس تي ٺھيل آھن.ٻيو آهي ڊي اين اي پول چپ.ڪلون ٿيل جين يا پي سي آر پروڊڪٽس سلائڊ تي ترتيب سان ڇپيل آهن.ڊي اين اي چپ ٽيڪنالاجي جو فائدو اهو آهي ته هڪ ئي وقت ۾ وڏي مقدار ۾ ڊي اين اي جي ترتيبن جو پتو لڳائڻ.پيٿوجن جي سڃاڻپ ڪندڙ چپ جو جديد نسخو هڪ ئي وقت 1700 کان وڌيڪ انساني وائرسن جي سڃاڻپ ڪري سگهي ٿو.ڊي اين اي چپ ٽيڪنالاجي روايتي نيوڪليڪ ايسڊ هائبرڊائيزيشن طريقن جي مسئلن کي حل ڪيو ۽ وائرل تشخيص ۽ ايپيڊميولوجيڪل مطالعي ۾ تمام وسيع ايپليڪيشنون آهن.